農(nóng)藥殘留檢測方法與步驟
檢測方法:酶抑制法
依據(jù)標準:國標GB/T 5009.199-2003
檢測儀器:RS-PR-24農(nóng)藥殘留快速檢測儀
試劑配置
準備:純凈水/蒸餾水(不能用礦泉水/山泉水)、緩沖液。
顯色劑:加11毫升緩沖液,粉末溶解、混勻即可。
底物:加11毫升純凈水,粉末溶解、混勻即可。
酶:不用另配,可直接使用。
樣品前處理
1.所有備檢樣品在檢測前無需進行水洗,否則影響數(shù)據(jù)準確度。
2.葉菜類:至少取不同株上的5片葉片疊加,剪成1cm見方秤取2g,加10ml提取液。
3.顏色深葉菜類:對一些葉綠素較高的蔬菜,也可采取整株蔬菜浸提方法,減少色素干擾。
4.非菜葉類:取果實的表皮,至少4克。用刀從上而下沿表面,削取一片,為增加檢測代表性,從不同的3個果實上削取一片,剪成1cm²大小,稱取4g。
5.豆類:用刀切片,其中毛豆去殼后檢測,在浸泡中會有部分白色外皮浸出,檢測液需進過濾。
6.水果類:如葡萄、提子、楊梅,整顆提取,取1顆,加提取液10ml,震蕩提取5分鐘,中間將樣品用玻璃棒轉(zhuǎn)位置,使樣品各表面充分接觸提取液。提取后取2.5ml上清液,再按正常步驟檢測。
特殊樣品前處理
部分樣品,如蔥,蒜,蘿卜,韭菜,芹菜,香菜,以及番茄汁液中含有對酶有影響的植物次生物質(zhì),容易產(chǎn)生假陽性,處理這類樣品的時候,可采取整株處理蔬菜浸泡或淋洗。
操作步驟
結(jié)果判定
1.△Ac值一定要>0.3,否則計算出來的樣品抑制率是錯誤的,這種情況請重做實驗。
(Ac值<0.3的原因:1、操作問題,加樣量不準確 2、酶溫度太低,或酶失去活性)
2.根據(jù)國家標準GB/T5009.199-2003要求,當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時,表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在,樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗2次以上,確保不是操作問題而導(dǎo)致的假陽性。如有必要,可用氣相色譜等方法作進一步確認。
3.陽性樣品復(fù)檢,在添加樣品名稱時,需把樣品編號改成初檢編號,初檢編號可在“查詢”中查看。
4.如需打印數(shù)據(jù),請在農(nóng)殘儀頁面未清空時打印。頁面清空后無法打印之前的數(shù)據(jù)。可在“查詢”,看數(shù)據(jù)是否已上傳。
5.如果需要重新做實驗:清空->關(guān)上蓋子->不放入比色皿,按“通道初始化”
如果需要添加菜名:設(shè)置->樣品名稱->添加
如果需要修改服務(wù)器:設(shè)置->數(shù)據(jù)中心->更改->確定
檢測結(jié)果處理
1.陰性結(jié)果:結(jié)果為陰性時,可直接上傳至系統(tǒng);
2.陽性結(jié)果:結(jié)果為陽性時,檢測樣品復(fù)檢多一次,如復(fù)檢結(jié)果為陰性,則可直接上傳數(shù)據(jù);如復(fù)檢結(jié)果還是為陽性時,則數(shù)據(jù)上傳后,檢測樣品做退換貨處理,并做好退換貨記錄備查。
注意事項
1.平時試劑需要放在2~8℃保存,緩沖液可直接放在室溫保存,配制好的試劑在使用前,要先恢復(fù)到室溫,否則會影響結(jié)果的準確性,試劑使用前請搖勻。
2.比色皿為易碎材質(zhì),需要小心保管,同時實驗過程中,請勿碰觸比色皿的光滑面,以免影響結(jié)果的準確性。
3.試劑避免交叉污染,取出后的試劑不可再打回瓶內(nèi)。
4.酶配制后經(jīng)常用10天內(nèi)用不完的,建議分裝為兩瓶保存,以避免酶因反復(fù)解凍而降低其活性。
5.每加一次試劑,移液器的槍頭都必須更換,避免試劑污染。
6.處理色素含量較高的果蔬樣品,應(yīng)采取整株(體)浸提,盡量避免過多色素浸出,干擾測定。若實驗室有條件,對色素干擾嚴重的過濾液,可用活性碳脫色處理.過濾或離心后,取清液作為待測液。
7.蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有對酶有影響的植物次生物質(zhì),容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時,可采取整株浸提,避免次生物質(zhì)干擾。
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